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ブロッティング装置製品情報 - GENIE® ブロッター(ウェットタイプ) -

ウェットタイプGENIE®ブロッターについて

GENIE®ブロッターは優れた均一性で高品質の電極プレートを使用した実績ある電気泳動転写装置です。

30V以下の低電圧電源を使用して、V/cmの高い電場を作る接近した電極の配置ができます。その結果、非常に迅速で正確な電気泳動転写を実現できます。

  • ウェスタンブロット(タンパク質)、サザンブロット(DNA)、ノーザンブロット(RNA)の処理ができます。
  • カセット式のためゲルや転写膜、バッファーのセットが簡単です。
  • ゲルの大きさに合わせ4種類の製品ラインナップがあります。
  • バブルスクリーンの採用により気泡のない処理を実現します。
  • 別売りの白金コート電極を使用することで腐食を大幅に軽減します。
  • 6V~30VDCまでの低電圧処理で熱の発生を防ぎます。
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- GENIE®ブロッターの主な特長 -
  • GENIE®を使用すればアガロースまたはアクリルアミドゲルからノーザンブロットを12V電圧で1.5時間の処理で可能です。
  • ウェスタンブロットの場合、電圧24Vわずか30分で優れた転写が得られます。
  • サザンブロットでは、ゲルの前処理を必要とせず高速での処理が可能です。
  • 限られた量の配列を検出するために高い感度を必要としたり、ライブラリクローンのデータ確認のために多くのサザンブロットを実行する研究室にも最適です。
  • CHEFゲルからのメガベースのDNAでさえも1時間でブロッティングが可能です。
  • GENIE®によるブロットは、真空法、加圧法、毛細管法よりも背景ノイズが低くなっています。
  • 均一な電場により、定量的なサザンブロット、ウェスタンブロット、ノーザンブロットが簡単です。

GENIE®の使用方法について
A Ten Minute Western Blot



20kD ~ 205kD Markers, Amido Black Stained

kD = キロダルトン ダルトンは質量の単位
A 30 Minutes Southern Blot


ヒトDNA検査の放射線写真
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- 1時間でメガベース(Mb=メガベース=100万塩基)DNAのサザンブロット -

Idea Scientific社製GENIE® ROYALを使用して、アガロースCHEFゲルを12ボルトで1時間の処理時間でブロッティングを行いました。

ブロットは10分間0.4NのNaOHに浸けて処理を実施しています。

Dr. Robert Haire, All Children Hospital, St Petersburg, Florida提供データ
従来のタンクタイプのブロッターは処理が遅く「バッファーを浪費する」だけでなく、エッジで保持するタイプのブロッティングカセットでは処理の間にゲルが滑り落ちることがありました。
セミドライブロッターは、電極周辺にガスのポケットを作り、電場を分散させ耐久性の低い電極の頻繁な交換が必要でした。
気泡なくバッファーを満たすことのできるトレーとして設計されたGENIE®はこれらの問題を解決する唯一のブロッターです。

<ブロッティングの準備>
カセットを水平な位置にして、陰電極、バブルスクリーン、パッド、ブロッティング濾紙、ゲルブロッティング膜、ブロッティング濾紙パッド、バブルスクリーン、陽電極、プラスチック電極カバーの順にセットし、トレーをトレーホルダーにスライドさせます。
それをそのまま垂直に立ててブロッティングを開始します。広いプレート電極はゲルをしっかり保持し、均一な電場を供給します。
 
- GENIE®によるブロット条件例 -
ゲル メンブレン バッファー 時間と電圧 備考
SDS-PAGEまたはNativeゲル
(20kD~200kD)
ニトロセルロース膜またはPVDF膜 25nM Tris-Glycine / 20% MeOH 12Vで60分
24Vで30分
6Vで30分の後
24Vで90分
PVDF膜は少なくとも15分間ブロッティングバッファーに浸ける
小さなタンパク質
(5kD~20kD)
0.2uニトロセルロース膜または小さいポアのPVDF膜 25nM Tris-Glycine / 20% MeOH 6Vで30分  
ペプチド
(5kD未満)
0.05uニトロセルロース膜 25nM Tris-Glycine / 20% MeOH 6Vで10分 ニトロセルロース膜はSchileicher and Schluellの#BA75
大きなタンパク質
(200kD以上)
ニトロセルロース膜またはPVDF膜 12.5mM Tris-Glycine / 10% MeOH(1/2X buffer #1)もし転写が悪い時はバッファーを調整する 24Vで1~2時間 0.01~0.05%のSDSをブロッティングバッファーに加える。またはMeOHを除去する。
酸性尿素ゲル、IEFまたはNativeゲル ニトロセルロース膜 0.7%酢酸 12Vで1時間 メンブレンは必ずゲルの陰極側にする。
直接塩基配列決定のためのタンパク質 小さいポアのPVDF膜 10mM CAPS / 10%
MeOH
12Vで30分
6Vで1時間
CAPSは一部タンパク質を沈殿させる。
RNAアクリルアミドゲル +帯電したナイロン 89mM TBE 12Vで30分 帯電していないナイロンでは働かない
RNAアガロースゲル +帯電したナイロン 89mM TBE 12Vで1.5時間 帯電していないナイロンでは働かない
RNAアガロースゲル +帯電したナイロン MOPSアセテート 6Vで2時間 帯電していないナイロンでは働かない
RNAアクリルアミドゲル +帯電したナイロン 89mM TBE 12Vで30分 帯電していないナイロンでは働かない
DNAアガロースゲル +帯電したナイロン 89mM TBE 12Vで1時間 1/2X TBEがしばしば使用される
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